核酸內(nèi)切酶的簡(jiǎn)單應(yīng)用

　　一、核酸內(nèi)切酶(endonuclease)在核酸水解酶中，為可水解分子鏈內(nèi)部磷酸二酯鍵生成寡核苷酸的酶，與核酸外切酶相對(duì)應(yīng)。從對(duì)底物的特異性來(lái)看，可分為DNaseⅠ、DNaseⅡ等分解DNA的酶；RNase、RNaseT1等分解RNA的酶。一般來(lái)說(shuō)，大都不具堿基特異性，但也有諸如脾臟RNase、RNaseT1等或限制性內(nèi)切酶那種能夠識(shí)別并切斷特定的堿基或堿基序列的酶。
 

　　二、原理作用：
 

　　(1)限制性酶切反應(yīng)速度與底物的性質(zhì)有很大的關(guān)系，底物的單雙鏈結(jié)構(gòu)、分子的構(gòu)型、DNA鏈中酶識(shí)別位點(diǎn)的數(shù)目以及位點(diǎn)附近的序列等都影響著酶的催化反應(yīng)。共價(jià)閉合環(huán)(超螺旋構(gòu)型)DNA比其相應(yīng)的線性分子的酶解作用要慢，要使超螺旋構(gòu)型DNA降解，需要的酶量就大。
 

　　(2)對(duì)于DNA-RNA雜合雙鏈的酶切作用，Molloy等用EcoRI等8種酶切時(shí)，結(jié)果其DNA鏈可被切割，但酶用量比雙鏈DNA大20-50倍。部分限制性酶還可切割單鏈DNA，如HaeⅢ等。
 

　　三、分類：
 

　　(1)Ⅰ型限制酶為復(fù)合功能酶，具有限制-修飾兩種功能，但在DNA鏈上沒(méi)有固定的切割位點(diǎn)，一般在離切割位點(diǎn)1kb到幾kb的地方隨機(jī)切割，不產(chǎn)生特異性片段。
 

　　(2)Ⅲ型酶與Ⅰ型酶基本相似，不同的是Ⅲ型酶有特異性的切割位點(diǎn)，但這兩類酶對(duì)DNA酶切分析的意義不大，通常所說(shuō)的限制性內(nèi)切酶是指Ⅱ型酶，它能夠識(shí)別與切割DNA鏈上的特定的核苷酸順序，產(chǎn)生特異性的DNA片段。